Analisa Chlorampenicol

Sejenis antibiotic berbentuk kristal putih yang larut dalam air yang rasanya sangat pahit. Pada umunya, digunakan untuk melawan bakteri gram negative, pseudomonas, rickettsiae, chlomyda , mycoplasma, dan enteriobakteriaceae.

Bahaya pemakaian antibiotic chlorampenicol pada produk perikanan :

Antibiotic tersebut sudah tidak efektif lagi melawan kuman penyakit

Gejala kepekaan atau alergi seperti gatal-gatal, timbul bintik-bintik merah, pingsan

Keseimbangan bakteri normal terganggu

kerusakan pada sumsum tulang belakang yang mengakibatkan diskrasia darah.

Alat yang digunakan:

• Labu ukur
• Pipet dan pipet boy
• Cawan Petri
• Food processor/blender
• Sendok stainless steel
• Timbangan analitik
• Beaker glass
• Tabung reaksi 50 ml
• Vortex mixer
• Centrifuge
• Tabung reaksi 15 ml
• Rak tabung reaksi
• Nitrogen evaporator
• Basket
• HPLC

Bahan Kimia / Reagen :

• Ethyl acetate
• Chloroform
• Hexane
• Aquadest

Prosedur :

Contoh dihomogenkan dengan menggunakan food processor / blender. Setelah itu masukkan ke dalam cawan Petri

Timbang contoh 5 – 6 gram ke dalam tabung reaksi 50 ml. tulis kode dan berat contoh pada ketas label dan tempelkan pada tabung reaksi

tambahkan 2 ml aquadest untuk mengikat chlorampenicol

Vortex selama 1 menit supaya contoh dapat bercampur. Diamkan 10 menit agar zat yang terkandung dalam sample lebih terikat dengan air.

Tambahkan 6 ml ethyl acetate, lalu vortex selama 1 menit.

Centrifuge selama 5 menit dengan kecepatan 4000 rpm. Dari proses ini akan dihasilkan 3 lapisan yaitu:

Ambil 4,2 ml lapisan teratas, dan pindahkan ke tabung reaksi 15 ml. lapisan merupakan lapisan organic yang mengandung CAP

keringkan dengan Nitrogen Evaporator dengan suhu 30⁰C hingga kering (± 20 menit)

Tambahkan 1 ml hexan, 1 ml chloform, untuk melarutkan CAP yang melekat pada tabung dan lemak yang mungkin masih tertinggal,. Lalu, tambahkan 1 ml aquadest, untuk mengikat CAP sehingga terpisah dari lemak.

Vortex selama 2 menit dengan kecepatan 25 rpm.

Centrifuge 10 menit 4000 rpm, dengan menggunakan suhu rendah. Maka akan terbentiuk 2 lapisan, yaitu :

CAP yang berikatan dengan air

chloroform dan hexana

Ambil lapisan atas, kemudian saring dengan filter sample. Filtrat tersebut di injek k eke HPLC

setelah didapatkan nilai CAP dari HPLC, kadar CAP dihitung dengan memasukkan harga absorbance contoh kedalam persamaan garis standart. Rumus perhitungan konsentrasi CAP, adalah:

Cone Heave Metals = (Ac – Ab) – a x fp

b x berat contoh

keterangan = Ac : Absorban contoh

Ab : Absorban blanko

a : Intercept dari persamaan regresi standar

b. : Slope dari persamaan regresi standar

fp : Faktor pengenceran/ factor perkalian